Выделение и идентификация гибридного рекомбинантного онкопротеина Е7 вируса папилломы человека 16 типа, конъюгированного с белком теплового шока 70

Ген рекомбинантного онкопротеина Е7 вируса папилломы человека 16 типа, конъюгированного с белком теплового шока 70 (Е7(16)-БТШ70), был экспрессирован в клетках дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Для получения целевого белка, его первичной идентификации и установления его подлинности был проведен ряд хроматографических выделений. Использование металл-хелатной хроматографии было основано на избирательном связывании активных групп сорбентов с полигистидиновым фрагментом на С-конце полипептидной последовательности целевого белка, в то время как применение аффинной хроматографии — на ассоциации с АТР-связывающими регионами Е7 и БТШ70. Степень чистоты целевого белка после обеих процедур не превысила 70%, что указывает на наличие множества низкомолекулярных примесей и продуктов олигомеризации целевой молекулы. Проведение хроматографической очистки в денатурирующих условиях с использованием сильных восстанавливающих агентов позволило выделить целевой белок, содержание мономера в котором превысило 97%. Посредством иммуноблотинга и электрофореза была установлена подлинность целевого белка, масс-спектрометрическим методом было показано соответствие его первичной структуры заявленной последовательности.