Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител
Грехов Максим Михайлович
14 сентября 2018
253
| Предметная область | — |
| Отрасли по ОКВЭД | — |
| Страна, регион, город | Российская Федерация, Москва |
| Отличия от конкурентов | — |
| Вид документа об охране ИС | изобретение |
| Номер документа ИС | 2560699 |
| Дата регистрации документа ИС | 2013-08-02 |
| Необходимые инвестиции для внедрения | договорная |
| Сроки внедрения | — |
| Стоимость предоставления технологии | договорная |
| Наличие экспертного заключения | Нет |
Польза для потенциального потребителя
1. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител, включающий подготовку поверхности наночастиц при помощи производных полиэтиленгликоля, отличающийся тем, что в С-концевую часть однодоменного антитела вводят гексагистидиновую последовательность аминокислот с терминальным остатком цистеина, проводят очистку металлоаффинной хроматографией, далее восстанавливают межмолекулярные дисульфидные связи для получения мономерных фракций антител со свободными сульфгидрильными группами, поверхность наночастиц модифицируют низкомолекулярными соединениями, содержащими тиольные группы, с последующим их замещением производными полиэтиленгликоля с гидроксильными и тиольными группами; гидроксильные группы активируют, проводят конъюгацию между С-концевым остатком цистеина однодоменного антитела и активированной гидроксильной группой производного полиэтиленгликоля на поверхности наночастицы, при этом распознающие центры однодоменных антител ориентированы в сторону расположения анализируемых молекул.
2. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 1, отличающийся тем, что в качестве наночастиц используют полупроводниковые нанокристаллы с разной длиной волны максимума флуоресценции.
3. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 1, отличающийся тем, что в качестве наночастиц используют магнитные наночастицы.
4. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 1, отличающийся тем, что в качестве наночастиц используют плазмонные наночастицы.
5. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 1, отличающийся тем, что в качестве наночастиц используют одностенные нанотрубки.
6. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по пп. 2, 3, 4, 5, отличающийся тем, что в качестве наночастиц используют гибридные материалы, представляющие собой комбинации перечисленных наносистем.
7. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 1, отличающийся тем, что в качестве первичного источника однодоменных антител используют особи семейства камелоидов или надотряда акул.
8. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 1, отличающийся тем, что селекцию однодоменных антител проводят методом фагового дисплея.
9. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 8, отличающийся тем, что селекцию однодоменных антител проводят методом фагового дисплея при помощи хелперного фага КМ13.
10. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 1, отличающийся тем, что после очистки однодоменных антител проводят реакцию восстановления межмолекулярных дисульфидных связей при помощи трис-(2-карбоксиэтил)фосфина для получения мономерной фракции антител со свободными сульфгидрильными группами.
11. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 10, отличающийся тем, что восстановление межмолекулярных дисульфидных связей при помощи трис-(2-карбоксиэтил)фосфина проводят в течение 25-35 минут при температуре 20-25°C.
12. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 1, отличающийся тем, что после модификации поверхности наночастиц производными полиэтиленгликоля, имеющими в своем составе гидроксильную и тиольную группы, конъюгирование наночастиц и однодоменных антител проводят через стадию активации поверхности наночастиц при помощи N-(п-малеимидофенил)-изоцианата.
13. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 12, отличающийся тем, что стадию активации поверхности наночастиц при помощи N-(п-малеимидофенил)-изоцианата проводят в диапазоне значений pH 8.4-8.6 в течение 30-60 мин в темноте при комнатной температуре и постоянном мягком перемешивании.
14. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 1, отличающийся тем, что наночастицы модифицируют смесью двух производных полиэтиленгликоля, имеющих в своем составе гидроксильную и тиольную группы или амино- и тиольную группы.
15. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 14, отличающийся тем, что после модификации поверхности наночастиц смесью двух производных полиэтиленгликоля, имеющих в своем составе гидроксильную и тиольную группы или амино- и тиольную группы, конъюгирование наночастиц и однодоменных антител проводят через стадию активации поверхности наночастиц при помощи сульфосукцинимидил-4-(N-малеимидометил)-циклогексан-1-карбоксилата.
16. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 15, отличающийся тем, что стадию активации поверхности наночастиц при помощи сульфосукцинимидил-4-(N-малеимидометил)-циклогексан-1-карбоксилата проводят в диапазоне значений pH 7.1-7.3 в течение 55-65 мин в темноте, при комнатной температуре и постоянном мягком перемешивании.
17. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 1, отличающийся тем, что после стадии активации поверхности наночастиц по пп. 13, 16 фракции активированных наночастиц подвергают очистке от избытка N-(п-малеимидофенил)-изоцианата и сульфосукцинимидил-4-(N-малеимидометил)-циклогексан-1-карбоксилата с помощью гель-фильтрационной хроматографии.
18. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 1, отличающийся тем, что полученные очищенные активированные наночастицы по п. 17 смешивают с мономерными однодоменными антителами, содержащими свободную сульфгидрильную группу С-концевого остатка цистеина по п. 1.
19. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 1, отличающийся тем, что реакцию конъюгирования очищенных активированных наночастиц по п. 18 и однодоменных антител, содержащих свободную сульфгидрильную группу С-концевого остатка цистеина, проводят путем инкубирования реакционной смеси в диапазоне значений pH 7.1-7.3 в течение 110-130 мин в темноте, при комнатной температуре и постоянном мягком перемешивании.
20. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 19, отличающийся тем, что после инкубации конъюгат наночастиц и однодоменных антител подвергают очистке с помощью гель-фильтрационной хроматографии.
2. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 1, отличающийся тем, что в качестве наночастиц используют полупроводниковые нанокристаллы с разной длиной волны максимума флуоресценции.
3. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 1, отличающийся тем, что в качестве наночастиц используют магнитные наночастицы.
4. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 1, отличающийся тем, что в качестве наночастиц используют плазмонные наночастицы.
5. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 1, отличающийся тем, что в качестве наночастиц используют одностенные нанотрубки.
6. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по пп. 2, 3, 4, 5, отличающийся тем, что в качестве наночастиц используют гибридные материалы, представляющие собой комбинации перечисленных наносистем.
7. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 1, отличающийся тем, что в качестве первичного источника однодоменных антител используют особи семейства камелоидов или надотряда акул.
8. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 1, отличающийся тем, что селекцию однодоменных антител проводят методом фагового дисплея.
9. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 8, отличающийся тем, что селекцию однодоменных антител проводят методом фагового дисплея при помощи хелперного фага КМ13.
10. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 1, отличающийся тем, что после очистки однодоменных антител проводят реакцию восстановления межмолекулярных дисульфидных связей при помощи трис-(2-карбоксиэтил)фосфина для получения мономерной фракции антител со свободными сульфгидрильными группами.
11. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 10, отличающийся тем, что восстановление межмолекулярных дисульфидных связей при помощи трис-(2-карбоксиэтил)фосфина проводят в течение 25-35 минут при температуре 20-25°C.
12. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 1, отличающийся тем, что после модификации поверхности наночастиц производными полиэтиленгликоля, имеющими в своем составе гидроксильную и тиольную группы, конъюгирование наночастиц и однодоменных антител проводят через стадию активации поверхности наночастиц при помощи N-(п-малеимидофенил)-изоцианата.
13. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 12, отличающийся тем, что стадию активации поверхности наночастиц при помощи N-(п-малеимидофенил)-изоцианата проводят в диапазоне значений pH 8.4-8.6 в течение 30-60 мин в темноте при комнатной температуре и постоянном мягком перемешивании.
14. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 1, отличающийся тем, что наночастицы модифицируют смесью двух производных полиэтиленгликоля, имеющих в своем составе гидроксильную и тиольную группы или амино- и тиольную группы.
15. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 14, отличающийся тем, что после модификации поверхности наночастиц смесью двух производных полиэтиленгликоля, имеющих в своем составе гидроксильную и тиольную группы или амино- и тиольную группы, конъюгирование наночастиц и однодоменных антител проводят через стадию активации поверхности наночастиц при помощи сульфосукцинимидил-4-(N-малеимидометил)-циклогексан-1-карбоксилата.
16. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 15, отличающийся тем, что стадию активации поверхности наночастиц при помощи сульфосукцинимидил-4-(N-малеимидометил)-циклогексан-1-карбоксилата проводят в диапазоне значений pH 7.1-7.3 в течение 55-65 мин в темноте, при комнатной температуре и постоянном мягком перемешивании.
17. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 1, отличающийся тем, что после стадии активации поверхности наночастиц по пп. 13, 16 фракции активированных наночастиц подвергают очистке от избытка N-(п-малеимидофенил)-изоцианата и сульфосукцинимидил-4-(N-малеимидометил)-циклогексан-1-карбоксилата с помощью гель-фильтрационной хроматографии.
18. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 1, отличающийся тем, что полученные очищенные активированные наночастицы по п. 17 смешивают с мономерными однодоменными антителами, содержащими свободную сульфгидрильную группу С-концевого остатка цистеина по п. 1.
19. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 1, отличающийся тем, что реакцию конъюгирования очищенных активированных наночастиц по п. 18 и однодоменных антител, содержащих свободную сульфгидрильную группу С-концевого остатка цистеина, проводят путем инкубирования реакционной смеси в диапазоне значений pH 7.1-7.3 в течение 110-130 мин в темноте, при комнатной температуре и постоянном мягком перемешивании.
20. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п. 19, отличающийся тем, что после инкубации конъюгат наночастиц и однодоменных антител подвергают очистке с помощью гель-фильтрационной хроматографии.